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天啦,白細(xì)胞介素4(IL-4)elisa試劑盒太好用啦

更新時間:2017-10-03      瀏覽次數(shù):1233

白細(xì)胞介素4(IL-4)elisa試劑盒簡介

IL-4

結(jié)構(gòu):人和小鼠的IL-4CDna均已克隆成功,并獲得了相應(yīng)的重組產(chǎn)品。成熟IL-4分子量為18~19KD的糖蛋白。

功能:主要由Th2細(xì)胞、肥大細(xì)胞及嗜堿性粒細(xì)胞產(chǎn)生(IL-4由抗原或絲裂原刺激的CD4+T細(xì)胞產(chǎn)生,活化的肥大細(xì)胞亦可產(chǎn)生IL-4。)。能夠促B細(xì)胞增殖、分化;誘導(dǎo)IgG1 和IgE產(chǎn)生;促進(jìn)Th0細(xì)胞向Th2細(xì)胞分化;抑制Th1細(xì)胞活化及分泌細(xì)胞因子;協(xié)同IL-3刺激肥大細(xì)胞增殖等。IL-4的生物學(xué)活性包括以下幾個方面:①促使抗原或絲裂原活化的B細(xì)胞分裂增殖,但其作用遠(yuǎn)弱于IL-2;然而IL-4能促使靜止的B細(xì)胞表達(dá)MHCⅡ類分子,增強(qiáng)B細(xì)胞的抗原遞呈能力,因此曾稱為B細(xì)胞刺激因子。IL-4是Ig重鏈基因類轉(zhuǎn)換的主要調(diào)節(jié)因子,能促使B細(xì)胞表達(dá)和分泌IgE。此外,IL-4還能誘導(dǎo)B細(xì)胞表達(dá)低親和力fc受體。②象IL-2一樣,IL-4也是CD4+T細(xì)胞的自分泌性生長因子;此外,IL-4還能促進(jìn)tc細(xì)胞的活性。③IL-4不能刺激巨噬細(xì)胞增殖,但可增強(qiáng)巨噬細(xì)胞的功能;巨噬細(xì)胞受刺激后Ⅱ類抗原和fcγr的表達(dá)量均明顯增加;同時巨噬細(xì)胞遞呈抗原的能力及對腫瘤細(xì)胞的細(xì)胞毒素作用也顯著增強(qiáng)。④IL-4與IL-3協(xié)同可維持和促進(jìn)肥大細(xì)胞的增殖,在某些起敏反應(yīng)性疾病發(fā)生中具有一定的意義;可與CSF協(xié)同作用,促進(jìn)骨髓造血前體細(xì)胞的增殖,誘導(dǎo)髓樣細(xì)胞定向分化;誘導(dǎo)內(nèi)皮細(xì)胞表達(dá)血管細(xì)胞粘附分子-1(VCAM-1),對淋巴細(xì)胞的遷移具有一定意義。

白細(xì)胞介素4(IL-4)elisa試劑盒試驗條件選擇

(1) 固相載體的選擇:許多物質(zhì)可作為固相載體,如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纖維素等。其形式可以是凹孔平板、試管、珠粒等。目前常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不管何種載體,在使用前均可進(jìn)行篩選:用等量抗原包被,在同一實驗條件下進(jìn)行反應(yīng),觀察其顯色反應(yīng)是否均一性,據(jù)此判明其吸附性能是否良好。

  (2) 包被抗體(或抗原)的選擇:將抗體(或抗原)吸附在固相載體表面時,要求純度要好,吸附時一般要求PH在9.0~9.6之間。吸附溫度,時間及其蛋白量也有一定影響,一般多采用4℃ 18~24小時。蛋白質(zhì)包被的zui適濃度需進(jìn)行滴定:即用不同的蛋白質(zhì)濃度(0.1、1.0和10μg/ml等)進(jìn)行包被后,在其它試驗條件相同時,觀察陽性標(biāo)本的OD值。選擇OD值zui大而蛋白量zui少的濃度。對于多數(shù)蛋白質(zhì)來說通常為1~10μg/ml。

  (3) 酶標(biāo)記抗體工作濃度的選擇:首先用直接ELISA法進(jìn)行初步效價的滴定(見酶標(biāo)記抗體部份)。然后再固定其它條件或采取“方陣法”(包被物、待檢樣品的參考品及酶標(biāo)記抗體分別為不同的稀釋度)在正式實驗系統(tǒng)里準(zhǔn)確地滴定其工作濃度。

(4) 酶的底物及供氫體的選擇:對供氫體的選擇要求是價廉、安全、有明顯地顯色反應(yīng),而本身無色。有些供氫體(如OPD等)有潛在的致癌作用,應(yīng)注意防護(hù)。有條件者應(yīng)使用不致癌、靈敏度高的供氫體,如TMB和ABTS是目前較為滿意的供氫體。底物作用一段時間后,應(yīng)加入強(qiáng)酸或強(qiáng)堿以終止反應(yīng)。通常底物作用時間,以10-30分鐘為宜。底物使用液必須新鮮配制,尤其是H2O2在臨用前加入。

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