乳酸脫氫酶（LDH）檢測(cè)試劑盒使用詳情


產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

LDH（EC 1.1.1.27）廣泛存在于動(dòng)物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中，是糖酵解途徑的末端酶，催化丙酮酸與乳酸之間的可逆反應(yīng)，伴隨著 NAD+/NADH 之間互變。LDH 催化 NAD+氧化乳酸生成丙酮酸，丙酮酸進(jìn)一步與 2, 4 - 二硝基苯肼作用生成丙酮酸二硝基苯腙，在堿性溶液中顯棕紅色，顏色深淺與丙酮酸濃度成正比。

操作步驟：

一、粗酶液提取：

1. 細(xì)菌、細(xì)胞或組織樣品的制備：

細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞：先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量（104個(gè)）：提取液體積（mL）為 500~1000：1 的比例（建議 500 萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞加入 1mL 提取液），超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞（冰浴，功率 20%或 200W，超聲 3s，間隔 10s，重復(fù) 30 次）；8000g 4℃離心 10min，取上清，置冰上待測(cè)。

組織：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織，

加入 1mL 提取液），進(jìn)行冰浴勻漿。8000g 4℃離心 10min，取上清，置冰上待測(cè)。

2. 血清（漿）樣品：直接檢測(cè)。

3. 丙酮酸鈉標(biāo)準(zhǔn)液：取 100µL 標(biāo)準(zhǔn)液，倍比稀釋至 1、0.5、0.25、0.125、0µmol/mL，用 2、1、0.5、0.25、0.125、0µmol/mL 做標(biāo)準(zhǔn)曲線。

LDH 活力單位計(jì)算：
1. 計(jì)算樣品丙酮酸的含量，即將?A 帶入回歸方程中（x），計(jì)算 y 值
2. 血清（漿）LDH 活力的計(jì)算
單位的定義：每 mL 血清（漿）每分鐘催化產(chǎn)生 1nmol 丙酮酸定義為一個(gè)酶活力單位。LDH（U/mL）=y×V 樣÷V 樣÷T×103=66.7×y
3. 細(xì)胞、細(xì)菌和組織中 LDH 活力的計(jì)算
（1）按樣本蛋白濃度計(jì)算：
單位的定義：每 mg 組織蛋白每分鐘催化產(chǎn)生 1 nmol 丙酮酸定義為一個(gè)酶活力單位。LDH（U prot）= y×V 樣÷（Cpr×V 樣）÷T×103=66.7×y÷Cpr需要另外測(cè)定，建議使用本公司 BCA 蛋白質(zhì)含量測(cè)定試劑盒。
（2） 按樣本鮮重計(jì)算：
單位的定義：每 g 組織每分鐘催化產(chǎn)生 1nmol 丙酮酸定義為一個(gè)酶活力單位。
LDH（U/g 鮮重）= y×V 樣÷（W÷V 樣總×V 樣）÷T×103=66.67×y÷W
（3）按細(xì)菌或細(xì)胞密度計(jì)算：
單位的定義：每 1 萬(wàn)個(gè)細(xì)菌或細(xì)胞每分鐘催化產(chǎn)生 1nmol 丙酮酸定義為一個(gè)酶活力單位。
LDH（U/104 cell）= y×V 樣÷（500÷V 樣總×V 樣）÷T×103=0.133×y
V 樣：反應(yīng)體系中加入的樣本體積，10µL=0.01mL；V 樣總：加入的提取液體積，1mL；T：反應(yīng)時(shí)間，15 min；Cpr：蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；W：樣品質(zhì)量，g；500：細(xì)胞或細(xì)菌總數(shù)，500 萬(wàn)；103：1µmol/mL=103nmol/mL。 

 

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