重組鏈霉親和素濃度測定方法

產(chǎn)品名稱：重組鏈霉親和素
英文名稱：Recombinant Streptavidin, r-SA
貨號：B2340
規(guī) 格：1 mg，10 mg，100 mg，500 mg
純 度：≥95%（SDS-PAGE 檢測）
存儲條件：-20℃保存

產(chǎn)品形式：冷凍干粉（5mM 磷酸鉀鹽緩沖液、海藻糖，pH 8.0） 

分子量：四聚體 62.4kDa，單體 15.6kDa（SDS-PAGE 檢測單體約為 16.5 kDa） 

活性：≥15U/mg 蛋白（Green 改良法測定） 

濃度測定：紫外吸收法，消光系數(shù) E(0.1% at 280 nm) =3.22 

內(nèi) 毒 素：≤5EU/mg 

來 源：大腸桿菌發(fā)酵工程菌株 

相關(guān)介紹： 

鏈霉親和素（Streptavidin，SA）是阿維丁鏈霉菌（Streptomyces avidinii）在生長過程中分泌的 一種同型四聚體蛋白。同親和素一樣，一摩爾的鏈霉親和素可以結(jié)合四摩爾的生-物素，與生-物素具 有很高的親和力。由于 SA 不含糖基且等電點接近于中性，因此 SA 在檢測應(yīng)用中具有比親和素更 低的非特異性結(jié)合水平。 該制品已被廣泛應(yīng)用于多種生物技術(shù)領(lǐng)域，諸如：包被免疫檢測用微孔板，制備 SA 偶聯(lián)酶制 劑，SA 偶聯(lián)熒光素、SA 偶聯(lián)磁珠等，進而參與酶聯(lián)免疫吸附和酶催化放大實驗，免疫組化化學(xué)、 生物分子純化、生物傳感器、生物納米微球、預(yù)靶向制藥研究和生物芯片被料等。 (該重組鏈霉親 和素 C 端含 His-Tag 標(biāo)簽，pI：7.0) 

使用方法：（僅供參考） 

由于產(chǎn)品生產(chǎn)工藝中凍干環(huán)節(jié)會引入保護劑等，為減少您的實驗誤差，建議先通過內(nèi)部檢測方 法，產(chǎn)品中蛋白進行準(zhǔn)確定量后，再進行后續(xù)實驗，并按實際情況進行產(chǎn)品用量調(diào)整。建議優(yōu)先選 擇紫外吸收法進行定量，方法如下： 將樣品從低溫條件下拿出后，平衡至室溫，并擦去瓶外附著的冷凝水，小心打開瓶蓋，防止干 粉飛濺損失。用去離子水或緩沖液進行復(fù)溶，充分溶解后，稀釋至合適濃度，小心移入比色皿中， 以去離子水或緩沖液為空白對照，測定樣品在 280 nm 處的吸光值（建議吸光值控制在 0.1-1.5 區(qū)間 內(nèi)），將其代入以下公式計算蛋白質(zhì)濃度： C = N × A280nm E(0.1% at 280nm)式中：C：樣品原液的蛋白質(zhì)質(zhì)量濃度（mg/mL） A280nm：蛋白質(zhì)溶液在 280nm 處測得的吸光值 N：稀釋倍數(shù) E(0.1% at 280nm)：1 mg/mL 蛋白質(zhì)的消光系數(shù) 例如將本產(chǎn)品凍干粉充分溶解并混勻后，取適量原液稀釋10倍，測得其在280 nm處的吸光值為0.966， 則原液的蛋白濃度為 10×0.966/3.22=3 mg/mL。 

注意事項： 

1. 鏈霉親和素凍干粉易溶于水，溶解性可達(dá) 10 mg / mL 或更高； 

2. 建議使用純水溶解； 

3. 如有未溶解物質(zhì)，建議延長復(fù)溶時間。也可以通過離心或其他方式除去不溶物后，再用于后 續(xù)實驗，不會對總蛋白產(chǎn)生很大的影響。 

4. 考慮到蛋白質(zhì)特殊性，凍干粉建議現(xiàn)用現(xiàn)配，溶解后應(yīng)避免反復(fù)凍融，如需多次使用，建議 按需分裝后凍存（-20℃）；避免在 4℃下長期存放。